- Математическая морфология.

Электронный математический и медико-биологический журнал. - Т. 6. -

Вып. 2. - 2007. - URL:

http://www.smolensk.ru/user/sgma/MMORPH/TITL.HTM

http://www.smolensk.ru/user/sgma/MMORPH/N-14-html/TITL-14.htm

http://www.smolensk.ru/user/sgma/MMORPH/N-14-html/cont.htm

УДК 616.592.7 – 002.3 – 089

Изменение клеточного состава в регенерирующей ткани экспериментальных ран свиней

Ó 2007 г. Кулешов С. М., Кулешова Ю. В., Кулешов Р. С.

(kuleshov.doc)

Приводятся результаты изменения клеточного состава фибробластического ряда и жировых клеток у свиней при лечении ран биологически активными препаратами. Высказывается предположение о роли жировых клеток в механизме заполнения раневого дефекта.

Применение биологически активных препаратов для активизации репаративных процессов является актуальной проблемой не только в медицине, но и ветеринарии. Для этой цели изучается действие препаратов различных фармакологических групп (ферменты, гормоны, витамины, химические вещества).

В наших исследованиях [1-5] для лечения ран мы использовали органические биологически активные вещества: полученные из гуминовых препаратов с элеутерококком (Биоэффект ДВ-1); гистолизаты из пантов северного и пятнистого оленей, Солодки уральской и Бархата Амурского.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ

Исследования проводили на различных видах животных: мышах, кроликах, свиньях. Белым мышам наносили кожные дефекты квадратной формы площадью 100 мм в области спины. Кроликам одновременно наносили две кожные раны прямоугольной формы, площадью 300 мм; первый в области подвздоха, второй – на наружной поверхности ушной раковины. У свиней в области наружной поверхности бедра трепаном наносили экспериментальные раны цилиндрической формы размером 20 мм в диаметре и 15мм в глубину.

На подопытных животных воздействовали препаратами парантеральным и пероральным способом. Подбирали концентрацию, дозу и метод, при котором будет оптимальное ранозаживляющее действие. Определяли клинические признаки регенерации. По окончанию опыта гистологическим методом изучали зрелость рубцующейся ткани. Материалом для гистоморфологических исследований служили рубцы, биопсированные на 16 и 22 сутки. Биоптаты фиксировали в 10% водном формалине, с последующим заключением в парафин. Гистосрезы толщиной 10-15 мкм получали на санном микротоме с последующей их окраской гематоксилин-эозином, для выявления коллагеновых волокон срезы окрашивали по Маллори, по общепринятым прописям (Меркулов Г.А., 1969; Волкова О.В., Елецкий Ю.К., 1982). Клеточные элементы подсчитывали, с использованием сетки Автандилова начиная подсчет, с донной части регенерата. Полученные результаты подвергали биометрической обработке по Ойвину.

Учитывая, что кожа, её клеточный состав, как в интактной и особенно в регенерате имеет сложное морфологическое строение мы выбрали, хорошо дифференцируемые и важные для регенерации клетки: фибробласты и жировые клетки.

Известно, что клетки фибробластического ряда выполняют продуцирование коллагенновых волокон заполняющих раневой дефект, а роль жировых клеток в процессе регенерации освещается незначительно.

В связи с этим мы поставили задачу выяснить их количественный состав в регенератах рубцовой ткани свиней в период, когда происходит отпадение струпа. Сравнивали с контрольной группой, где обработку ран гелевыми, биологически активными препаратами не производили и кожей в норме.

Полученные результаты, представленные в таблице 1-2 свидетельствуют, что количестве клеток фибробластов на 16 сутки становится в контрольной без лечения группе больше, чем интактной коже в три раза, а в группах с обработкой ран: гистолизатами пантов северного оленя; Биоэффект ДВ-1; Бархатом Амурским и Солодкой Уральской более чем в два раза.

1. Гистоморфологические показатели рубцующейся ткани при лечении ран биологически активными препаратами

Признаки	Интактная ткань	Биоптат , 16 суток
		гистолизат северного оленя	Биоэффект ДВ-1	Бархат амурский	Солодка уральская	Контроль, без лечения
Фибробласты	67,4 ± 0,93	161,4 ± 0,64***	151,6 ± 1,2^***	139,2±0,43**	123,7±0,78**	221 ±1,32
Жировые клетки	79,3 ± 1,00	51,2 ± 0,46**	39,0 ± 0,87**	37,0±0,45***	46,8±0,33***	47,7 ± 0,54

Примечание: Уровень достоверности (Р) значений выведен при сравнении с контролем, без лечения: **Р<0,01; ***Р<0,001; Препараты для лечения применялись наружно на гелевой основе.

2. Гистоморфологические показатели рубцующейся ткани после лечения ран биологически активными препаратами

Признаки	Интактная ткань	Биоптат , 22 суток
		Биоэффект ДВ-1	Бархат	Солодка	Контроль, без лечения
Фибробласты	67,4 ± 0,93	78,4 ± 0,86***	83,6±0,54***	76,2±0,45**	147,2 ± 1,12
Жировые клетки	79,3 ± 1,06	66,0 ± 0,55***	65,2±0,63***	71,2±0,43***	23,3 ± 0,76

Примечание: Уровень достоверности (Р) значений выведен при сравнении с контролем, без лечения; имел Р<0,001; во всех группах.

Жировых клеток в препаратах из опытных групп было почти в два раза меньше, чем в интактной коже.

На 22 сутки количество клеток фибробластического ряда в рубцовой ткани уменьшилось, почти в два раза, меньшим уменьшение было в контрольной группе. Количество жировых клеток в опытных группах приближалось к показателям в интактной кожи. В контрольной группе их было меньше, чем в интактной в три раза.

Наше заключение, подтверждаемое при изучении морфоструктуры гистопрепаратов следующее.

1. Количество фибробластов в регенерирующей ткани уменьшается после отпадения струпа и покрытия дефекта эпителием.

2. Количество жировых клеток в регенератах меньше, чем в интактной коже.

Возможно, жировые клетки в процессе репарации трансформируются в другие клеточные элементы.

При изучении гистопрепаратов было отмечено, что жировые клетки проникают в регенерат с подкожной клетчатки, как одиночно, так и некомпактными группами. Они, могут сливаться из нескольких, образуя значительные по размеру образования. В объеме регенерата жировые клетки занимают значительную часть и вероятно за счет них более активно заполняется раневой дефект.

ЛИТЕРАТУРА

1. Ярцев В.Г. Способ получения «Пантолизата»: 961112592 РФ/В.Г. Ярцев - № 2112396; Заявл. 21.06.96; Опубл. 10.06.98.

2. Кулешов С. М. Применение гумата натрия для лечения экспериментальных и случайных ран у животных: дис.... канд. вет. наук. /С.М.Кулешов.- М., 1986.-136 с.

3. Патент. 2235548 Российская Федерация, МПК7 А 61 К 35/10 35/78 31/715 А 61 Р 41/00 Ранозаживляющее средство /Любченко Е.Н., Анисимов М.М., Кулешов С.М.; заявитель и патентообладатель ТИБОХ Дальневосточного отделения РАН.- №2003113570; заявл. 08.05. 03; опубл.10.09.2004, Бюл.№25.-5 с.

4. Патент. 2248802 Российская Федерация, МПК 7 А 61 К 35/32 Способ изготовления геля из пантов и отходов их фармацевтической переработки / Кулешов Р.С., Ярцев В.Г., Кулешов С.М.: заявитель и патентообладатель Дальневосточный государственный аграрный университет.-№ 2003113507/15; заявл. 07.05.2003;опубл. 20.11.2004, Бюл. № 9

5. Кулешов С.М. Ранозаживляющее действие биологически активных препаратов органического происхождения /С.М Кулешов, Р.С.Кулешов [Электронный ресурс] //Политематический сетевой электронный научный журнал КубГау.-2007.-№ 26(2). Режим доступа: http://ej.kubagro.ru /2007/02/pdf/17pdf

CELLULAR COMPOSITION CHANGE IN REGENERATION TISSUE OF EXPERIMENTAL WOUNDS HEALING IN PIGS

Kuleshov S. M., Kuleshova Y. V., Kuleshov R. S.

In our work are resulted of cellular composition change fibroblast series and liposyte cells in pigs when healing wound by biological active preparations. There are suggested about of lipocyte cells role in fill up wound healing mechanism.

Кафедра незаразных болезней хирургии и акушерства

Институт животноводства и ветеринарной медицины

Приморская государственная сельскохозяйственная академия

Поступила в редакцию 26.05.2007.

АВТОРСКАЯ СПРАВКА

КУЛЕШОВ Сергей Михайлович - кандидат ветеринарных наук, доцент Институт животноводства и ветеринарной медицины Институт животноводства и ветеринарной медицины ФГОУ ВПО ПГСХА.

КУЛЕШОВА Юлия Викторовна - аспирантка Приморской государственной академии, Институт животноводства и ветеринарной медицины,

КУЛЕШОВ Роман Сергеевич – аспирант Приморской государственной академии, Институт животноводства и ветеринарной медицины,

КУЛЕШОВ СЕРГЕЙ МИХАЙЛОВИЧ:

Кандидат ветеринарных наук, доцент:

Приморская сельскохозяйственная академия, институт животноводства и ветеринарной медицины. Кафедра незаразных болезней хирургии и акушерства Приморский край, г. Уссурийск пр. Блюхера 44

Индекс: 692500

Тел. (84234) 36 54 70

Домашний адрес

Приморский край г. Уссурийск

Ул. Раздольная д.10. кв. 98

Тел. 8 4234 32 25 48. Электронная почта vetcomus@mail.ru

Статья публикуется впервые и является составной частью комплексной программы исследований кафедры незаразных болезней, хирургии и акушерства института животноводства и ветеринарной медицины ФГОУ ВПО «Приморская государственная сельскохозяйственная академия» по изучению "Влияние биологически активных веществ на морфологию рубцующейся ткани у животных" (номер государственной регистрации 01.20.0308.406). Руководитель работы Кулешов С.М.

Настоящая работа является составной частью комплексной программы исследований кафедры незаразных болезней, хирургии и акушерства института животноводства и ветеринарной медицины ФГОУ ВПО «Приморская государственная сельскохозяйственная академия» по изучению "Влияние биологически активных веществ на морфологию рубцующейся ткани у животных» (номер государственной регистрации 01.20.0308.406). Руководитель работы Кулешов С.М.